Recuento de plaquetas

Objetivo: Que el alumno aprenda a contar correctamente las plaquetas.

Introducción:

Las plaquetas son los elementos formes mas pequeños de la sangre, actúan en la hemostasia y en el mantenimiento de la integridad vascular, ademas de participar en el proceso de la coagulación sanguínea.

Las plaquetas son difíciles de contar debido a que son pequeñas y deben distinguirse de los restos celulares. otra fuente de dificultad reside ne en su tendencia de adherirse al cristal , a cualquier cuerpo extraño y en particular unas de otras.

Para el conteo de plaquetas se utiliza oxalato de amonio como diluyente y se cuentan en los mismos cuadros para glóbulos rojos y el resultado se multiplica por 1000.

Material y Reactivos

1. Pipeta de thoma para globulos blancos
2. Microscopio
3. Caja de Petri con papael filtro
4. Camara de Neubauer 
5. Oxalato de amonio al 1%
6. Sangre venosa con EDTA

Procedimiento 

1. Mezclar la sangre perfectamente.
   
2. Aspirar la muestra hasta la marca 0.5
   
3. Limpiar con una gasa el exceso de sangre y aspirar oxalato de amonio hasta la marca 11.
   
   
4. Mezclar de 3 a 5 min. desechar las 3 primeras gotas y llenar las cuadriculas de la cámara de Neubauer.
   
5. Dejar sedimentar de 10 a 15 min. la cámara en una caja petri con un disco de papel filtro húmedo en el fondo para evitar la evaporación.
   
6. Enfocar la camara y contar las plaquetas en los mismos cuadros para globulos rojos empleando el objetivo 40 X.
   
7. La plaquetas contadas se multiplican por  1 000 para obtener el numero de plaquetas por mm.

RESULTADOS

• Los recuentos de plaquetas, al igual que los eritrocitos y leucocitos,  se expresan como concentraciones, que en este caso serían número de células por unidad de volumen de sangre, que es 1mm3
• Después de contar las plaquetas presentes en los 400 cuadritos centrales, el número obtenido se multiplica por el factor de dilución  de la siguiente manera:
• N° de plaquetas x mm3 = No. De plaquetas contadas X dilución X 10
• Dilución: 1:100 
• Este factor corresponde, para obtener los resultados por mm3 ya que el volumen de la cámara es de 0.1 mm3
• El número de plaquetas fue de 320, por lo que al realizar los cálculos quedaron así:
• No. de plaquetas = 320 X 100 X 10= 320 000 plaquetas por mm3, lo que indica un índice esta en el rango normal  de plaquetas.

VALORES DE REFERENCIA

(Millones de células/mm3)

Hombres y Mujeres:………………………………..150 000 - 450 000

CONCLUSIÓN

El recuento de plaquetas es de suma importancia y es parte del recuento celular de la sangre como prueba de rutina.

El paciente con un trastorno hemorrágico, clínicamente significativo, acude al médico con algunos tipos de síntomas hemorrágicos, con lo que se puede indicar la parte defectuosa del mecanismo de coagulación, y dentro de estas causas pueden estar la cantidad inadecuada de plaquetas.

La hemorragia de vasos sanguíneos subcutáneos  en piel intacta se puede ver como petequias o equimosis. Cuando se encuentran  equimosis en gran cantidad y sin traumatismo aparente, el trastorno se conoce como Diátesis Hemorrágica y puede ser producida por anormalidades en los vasos sanguíneos, por la disminución en el número de plaquetas o por el mal funcionamiento.

TINCION DE WRIGHT

Solución colorante poli cromática para la tinción diferencial de la mayoría de las estructuras de sangre así como algunos de sus parásitos, por el método de Wright. Uso exclusivo de diagnóstico in vitro.

REACTIVOS.

1.- Colorante de Wright.

2.- Buffer de Fosfato.

PROCEDIMIENTO.

1. Se procede a realizar un frotis sanguíneo por medio de punción venosa.
   
2. Colocar la placa con la extensión hacia arriba en una gradilla de tinción.
   
3. La extensión se cubre con 1-2 ml del colorante durante 3 o 4 minutos.
   
4. Agregar suavemente Buffer de Fosfatos en la misma cantidad que el colorante y mezclar soplando sobre la superficie pero evitando derrames. Dejar de 8 a 10 minutos hasta que aparezca una escarcha metálica.
   
5. Quitar el colorante con agua destilada en forma horizontal, luego tomando la placa en forma vertical, continúe el lavado hasta que haya desaparecido toda la coloración azul.
   
   
   
6. Secar al aire en la posición vertical sobre papel absorbente.

RECUENTO DIFERENCIAL DE LEUCOCITOS.

INTRODUCCION.

El recuento diferencial de leucocitos consiste en reconocer y valorar las proporciones relativas de las distintas variedades de glóbulos blancos que se observan en el frotis teñido de sangre.

Al conocer la proporción de células sanguíneas que están presentes en el torrente sanguíno cualquier trastorno patológico que altere el sistema hematopoyético podría verse reflejado un cambio de la proporción de una especie celular. Para el recuento diferencial se tiene que observar un mínimo de 100 leucocitos.

Hay varios métodos de recuento diferencial de leucocitos pero el más utilizado es el de almena y en línea.

MATERIAL Y REACTIVOS.

.-Frotis sanguíneo teñido.

.-Microscopio.

.-Aceite de inmersión.

.-Un contador de células.

PROCEDIMIENTO.

1.  Se coloca el frotis en el microscopio y se enfoca.
   
2. Se le agrega una gota de aceite de inmersión y se observa con el objetivo de 100X
3.  Si el recuento se hace en línea se empieza en el borde del frotis hasta el otro borde  en línea paralela hasta contar 100 leucocitos.
4. Se van contando los mononucleares (monocitos y linfocitos) y los polimorfonucleares (neutrófilos, basófilos y eosinofilos) según su morfología.
   
5.  Se reportan en % (valor relativo) o en valor absoluto (mm3)

VALORES DE REFERENCIA.

	ADULTOS	NIÑOS
LINFOCITOS	20-55%	20-50%
MONOCITOS	2-6%	0-9%
EOSINOFILOS	1-5%	0-8%
BASOFILOS	0-1%	0-1%
NEUTROFILOS	45-70%	20-60%
BANDAS	0-5%	1-6%

Resultados:

LINFOCITOS: 40%

MONOCITOS: 3%

EOSINOFILOS: 2%

BASOFILOS: 0%

NEUTROFILOS: 58%

BANDAS: 4%

Conclusión

De acuerdo a como se haya realizado nuestra tinción y en base a los conocimientos previos que tengamos de la identificación de estructuras leucocitarias, podremos identificar con facilidad estos cuerpos, cuantificándolos y diferenciándolos para conocer el estado de salud del paciente y así contribuir al diagnóstico de posibles leucemias u otras enfermedades. En base a los resultados obtenidos y comparándolos con los valores de referencia podemos deducir que nuestro paciente se encuentra en condiciones normales

CONTEO DE LEUCOCITOS

Introducción:

El conteo de los elementos formes de la sangre es indispensable para la hematología diagnostico Para contar los leucocitos se diluye una cantidad exacta de sangre con el líquido Turk, que es una solución hipotónica que destruye a los eritrocitos y observa la estructura de los leucocitos, esta mezcla se coloca en una cámara de Neubauer y se cuenta el número de células en los cuadros indicados.

Material y Reactivos

• Pipeta de toma para globulos blancos
• Una cámara de Neubauer
• Un microscopio
• Gasas
• Sangre venosa con EDTA

PROCEDIMIENTO

1. Obtener sangre venosa con EDTA y mezclar perfectamente.
   
2. Aspirar sangre con la pipeta de Thoma hasta la marca 0.5.
   
3. Limpiar la parte externa de la pipeta con gasa o papel absorbente.
   
4. Aspirar liquido de Thurk hasta la marca 11.
   
5. Retirar la boquilla de la pipeta y sellar los extremos con papel parafilm.
   
6. Agitar la pipeta de Thoma de 3 a 5 min. y preparar la cámara con el cubrehematimetro.
   
7. Descartar las primeras 3 gotas y llenar la cámara por capilaridad por uno de los bordes del cubrehematímetro, sin que se formen burbujas o sobrepasen los canales de la cámara.
   
8. Dejar reposar de 3 a 5 min. la cámara con la muestra.
   
9. Enfocar la cámara en 1 microscopio y contar los leucocitos con el objetivo seco débil en 64 cuadros de las 4 cuadriculas de los extremos.
   
10. Multiplicar el número de leucocitos contados por 50
    

                   

RESULTADOS

Los recuentos de leucocitos, al igual que los eritrocitos,  se expresan como concentraciones, que en este caso serían número de células por unidad de volumen de sangre, que es 1mm3

Después de contar los glóbulos blancos de los 4 cuadrados angulares, se suman el total de ellos y con dicha cantidad de hace el siguiente cálculo:

N° de leucocitos x mm3 = altura x dilución x área 

N° de leucocitos x mm3 = 1/10 x 1/20 x 4 = 1/10 000

N° de leucocitos x mm3 = 4/200 = 1/50

N° de leucocitos x mm3 = N° de leucocitos contados x 50

Resultado

El número de leucocitos fue de 178, que al multiplicarse por 50 daba como resultado 8900/mm3, lo que indica un índice normal, pues el paciente era mujer, de 17 años de edad.

VALORES DE REFERENCIA

(Millones de células/mm3)

Hombres y Mujeres:………………………………..5 000-10 000

Valores de referencia:

Leucocitos:

• Adultos: 5000 - 10 000 / mm3
• Recién nacidos: 10 000 - 25 000 / mm3
• Niños: 8000 - 15 000

Conclusión  

La modificación del porcentaje de leucocitos puede orientar al diagnóstico de enfermedades infecciosas, inflamatorias, y otros procesos.

Cuando en la medición de leucocitos se ven células jóvenes aparecen los neutrófilos en forma de núcleo en forma de bastón (cayados), y un aumento del porcentaje de los glóbulos blancos polimorfonucleares. Esto se denomina como "desviación a la izquierda". Este término sugiere infecciones bacterianas agudas.

La eosinofília, que es el aumento del porcentaje o del número total de eosinófilos, sugiere un cuadro alérgico o una infección parasitaria.

El recuento de leucocitos se realiza habitualmente en un estudio de hematimetría y recuento leucocitario completo.

RETICULOCITOS

OBJETIVO: Que el alumno aprenda a identificar y cuantificar correctamente a los retículocitos.

INTRODUCCIÓN: Los retículocitos son eritrocitos jóvenes y contienen en su interior RNA- ribosomal el cual puede observarse en forma de red (de ahí su nombre) mediante un colorante supravital. Cuando en la médula osea aumenta la eritropoyesis, aumenta también el número de reticulocitos que salen hacia la circulación.

MATERIAL, REACTIVOS Y EQUIPO:

• Sangre venosa con EDTA
• Colorante de azul de cresil brillante o nuevo azul de metileno 
• Tubos de ensaye
• Portaobjetos
• Pipetas pasteur tallo corto con bulbo
• Baño maría
• Microscopio
• Aceite de inmersión
  
  

PROCEDIMIENTO

1. Mezclar la muestra sanguínea y en un tubo de ensaye colocar 5 gotas con una pipeta Pasteur
   
2. Agregarle 5 gotas del colorante con una pipeta Pasteur y mezclar
   
3. Incubar el tubo de ensaye a 37°C durante 15 min en el baño maría
   
4. Mezclar la suspensión y realizar un frotis en portaobjetos
   
5. Dejarlo secar a temperatura ambiente, agregarle una gota de aceite de inmersión y observar con el objetivo 100x. 
   
6. Buscar células que presenten una red con coloración azul (reticulocitos). contar 1000 eritrocitos en diferentes partes del frotis e ir registrando el número de reticulocitos observados.
   

RESULTADO:

Numero de reticulocitos observados x 100/ número total de eritrocitos

VALORES DE REFERENCIA

ADULTOS: 0.5-2.0%

RECIEN NACIDOS: 2.5-6.5%

RESULTADO: 

18 X 100/ 1000 = 1.8%, el paciente está dentro de los valores normales en adultos. por lo tanto son correctos los cálculos 

Observaciones:

Los reticulocitos se pueden observan como hematíes con granulaciones o filamentos, de color azul oscuro. También podemos observar con esta tinción cuerpos de Heinz, que son alteraciones en las cadenas de hemoglobina o déficit de alguna enzima eritrocitaria, dan lugar a la hemoglobina inestable que se desnaturaliza con facilidad dando lugar a precipitado dentro del hematíe.

Indices Eritrocitarios

INTRODUCCIÓN 

Los índices eritrocitarios también se denominan como índices hematimétricos o índices corpusculares. Son una serie de parámetros que expresan diferentes características de los hematíes. Los tradicionales se calculan a partir de los valores obtenidos, previamente, del número de hematíes (en millones por mm3), del hematocrito (en %) y de la concentración de hemoglobina en la sangre (en g/dl).Los auto analizadores hematológicos son capaces de proporcionar los índices tradicionales, y además, suministran otros nuevos.

Prestan una ayuda eficaz para diferenciar las anemias y da una mejor visión de la morfología del glóbulo rojo y se clasifican en:

VCC Nos da una idea del volumen corpuscular medio de los hematíes. Nos permite saber si son:

• Normocíticos: tamaño normal
• Macrocíticos: tamaño grande
• Microcíticos: tamaño pequeño

Fórmula:   (Hematocrito) x (10) / (Nº hematíes/L)

Valores normales: 82-92 M3

CHCM (Concentración corpuscular media de hemoglobina)

Expresa el promedio de la concentración hemoglobina del hematíe.

Da la relación entre el peso de la Hgb y el volumen del hematíe.

Fórmula: (Hb) x (10) / (hematocrito)  %

Valores normales: 32-36%

 Nos indica si los hematíes son:

• Normocrómicos: normalmente cargados de Hgb
• Hipocrómicos: poco cargados de Hgb
• Hipercrómicos: muy cargados de Hgb

HCM (Hemoglobina corpuscular media)

Expresa el peso medio de Hgb en el hematíe. Su resultado estará en relación con el VCM y MCHC.

Fórmula: (Hgb) x (10) / (Nº hematíes/l).      

Valores normales: 27-31 microgramos.

Indices Eritrocitarios
(valores absolutos)

1.  V.C.C  en M3  (82-92)
2. H.C.M en pg (29-32)
3. C.H.C.M   en % (32-36)

valores

Eritrocitos: 5810000

Hemoglobina: 17.4 g/dl  (Estándar) 

Hematocrito:  53

RESULTADOS

1. V.C..M  (53 % ) (10) /5810000 = 91.2 M3
2. M.C.M (17.4 g/dl) (10) / 5810000=  29.9 pg
3. C.H.C.M (17.4 g/dl) (10) / 53= 32.8 %

HEMATOCRITO

INTRODUCCIÓN

El hematocrito es el volumen que ocupan los eritrocitos en una muestra sanguínea y se expresa en porcentaje.

La determinación de hematocrito es un método sencillo y confiable para detectar anemia o policitemia.

El hematocrito se puede detectar mediante dos métodos:

1. MACROMETODO (WINTROBE)
2. MICROMETODO

OBJETIVO

Aprender a realizar la prueba del hematocrito utilizando el macro y micrométodo, conocer su importancia en el diagnóstico de enfermedades y la forma adecuada de su procedimiento.

MATERIAL Y REACTIVOS

• Tubo de wintrobe         Sangre venosa
• Tubo capilar
• Plastilina
• Centrifuga
• Microcentrifuga
• Pipeta Pasteur de tallo largo
• Equipo para venopuncion
• Lector para hematocrito o regla

TECNICA (MACROMETODO)

1. Mezclar la muestra sanguínea suavemente y con una pipeta pasteur o cánula llenar el tubo de wintrobe, colocando la punta de la pipeta hasta el fondo del tubo, la punta de la pipeta se va elevando pero permaneciendo por debajo del menisco de sangre para evitar la formación de burbujas o espuma.
   
2. El tubo se llena hasta la marca 100 con la muestra sanguínea y se pone a centrifugar durante 30 minutos a 3,000 r.p.m.
   
   
3. Se efectúa la lectura.
   

Lectura:

Del tubo graduado se mide directamente el nivel de la columna de glóbulos rojos.

Valores de referencia:

Hombres: 47% - 50%

Mujeres: 42% - 50%

TÉCNICA (MICROMETODO)

1. Mezclar la muestra sanguínea adecuadamente y llenar un tubo capilar hasta 3/4 partes.
   
2. El extremo vació que no estuvo en contacto con la sangre se sella con plastilina o calor.
   
3. El tubo con la muestra sanguínea se coloca en la microcentrifuga a 10,000 r.p.m. durante 10 minutos.
   
4. Leer el porcentaje de hematocrito en el lector o medirlo con la regla.
   

Se considera a la medida total de eritrocitos, leucocitos y plasma en mm como un 100% y con la medida de solo los eritrocitos tambien en mm se obtiene su porcentaje con respecto a este por medio de una regla de tres:

Medida total= 58 mm (eritrocitos, leucocitos y plasma)

Medida de eritrocitos= ¿? mm

Resultados 

Macrometodo:

En el tubo de Wintrobe se mide directamente el nivel de la columna de glóbulos rojos, comparando el número de la lectura con los siguientes porcentajes:

Hombres: 47.0 ±5.0%

Mujeres: 42.0 ±5.0%

Niños (5 años) 38%-44%

La sangre de la paciente en este caso era de una mujer, y nos dio  como resultado hasta la marca 4.7 de eritrocitos, estando en un rango normal.

MICROMETODO: 47%

Micrometodo

Se considera a la medida total de eritrocitos, leucocitos y plasma en mm como un 100% y con la medida de solo los eritrocitos tambien en mm se obtiene su porcentaje con respecto a este por medio de una regla de tres:

Medida total= 58 mm (eritrocitos, leucocitos y plasma)

Medida de eritrocitos= 29 mm

58 mm -------------------------- 100%

29 mm ------------- x (hematocrito)

HEMATOCRITO: 50 %

Conclusión:

El hematocrito es la medición del volumen de glóbulos rojos en la sangre en porcentaje y mediante la centrifugación separamos en tres niveles que son los eritrocitos, plaqueta y leucocitos y hasta arriba el plasma, este examen nos sirve principalmente para diagnosticar algunas enfermedades como pueden ser anemias, leucemias o policitemias

 Si los niveles son bajos pueden deberse a:

• Anemia
• Sangrado
• Destrucción de los glóbulos rojos
• Leucemia
• Desnutrición
• Sobre-hidratación

 Si los niveles son altos puede deberse a:

• Cardiopatía congénita
• Deshidratación
• Eritrocitosis
• Niveles bajos de oxigeno en la sangre
• Fibrosis pulmonar
• Policitemia

 La técnica más fácil de realizar fue la de macro hematocrito con el tubo de wintrobe ya que es más fácil dar un resultado aunque ambas técnicas son efectivas pero en la de microhematocirto se puede hacer con dos muestras diferentes ya sea capilarmente o con la venopunción