GRUPO SANGUÍNEO Y FACTOR Rh.

DETERMINACIÓN DE AGLUTINÓGENOS (TIPADO GLOBULAR)

En la membrana del glóbulo rojo existen complejos químicos llamados antígenos que representan los llamados grupos de factores sanguíneos.

Se sabe que estos complejos químicos se han generado de una sustancia llamada precursora, llamada sustancia h (humana). Sobre esta sustancia se adhieren carbohidratos en un orden determinado. Para la sangre de tipo cero “O” se unen dos moléculas de galactosa, una de mucosa, una de glucosa y una de glucosamina.

Sobre esta cadena puede adherirse una nueva molécula y se cambia el tipo, si es de glucosamina se tiene el grupo “A” y si es de galactosa se tiene el grupo “B”. Si se unen ambas moléculas en diversa posición se tiene el grupo ab:

Los primeros grupos sanguíneos que se descubrieron fueron los llamados ABO y actualmente se conocen muchos más.

El sistema Rh es independiente del sistema ABO, pero igual de importante en la tipificación sanguínea.

Hay antígenos presentes en los eritrocitos de casi todas las personas y se les llama universales, otros antígenos se han concentrado en una sola familia y se les llama familiares y se han encontrado algunos otros  que pertenecen solamente a un individuo y se les llama personales.

La importancia de la determinación de los grupos sanguíneos y Rh en el laboratorio es en las transfusiones sanguíneas y en la eritroblastosis fetal.

FACTOR RH

OBJETIVO: El alumno determinara el grupo sanguíneo y el factor Rh de una muestra sanguínea, utilizando los antisueros correspondientes y previa demostración correctamente.

INTRODUCCIÓN

Los grupos sanguíneos se han clasificado así por poseer características diferentes, estas características son los antígenos (aglutinógenos) y los anticuerpos (aglutininas) que son los responsables de las reacciones adversas inmunológicas en las transfusiones.

 

REACTIVOS

1. Suero anti A
2. Suero anti B
3. Suero anti D
4. Sol. isotónica de NaCI al 0.9%

MATERIAL

• Equipo de extracción sanguínea
• 1 placa de virio escavada
• Aplicadores de madera (palillos)
• Lanceta estéril
• 8 tubos de ensaye 10x100
• Gradilla
• centrifuga

MÉTODO PARA PORTAOBJETOS O PLACA.

TÉCNICA.

1. Se utiliza la punción cutánea  por medio de la lanceta, se desecha la primera gota se deposita una gota en cada una de las excavaciones de la placa en forma horizontal y marcar con letras A, B, AB, y Rh posteriormente se añade una gota den suero Anti A, Anti B y Anti D respectivamente.
   
   
   
   
   
   
   
   
   
   
2. Mezclar perfectamente con un hisopo (aplicador) cada preparación (no contaminar las diferentes preparaciones)
   
3. Agitar suavemente la placa con movimientos circulares durante 30 segundos aproximadamente.

RESULTADOS

El paciente tiene un grupo sanguíneo: A Rh (positivo)

MÉTODO DE TUBO DE ENSAYE

TÉCNICA.

1. Previa asepsia practicar venopuncion y recoger 1ml. De sangre.
   
2. Depositar en un tubo de ensaye .2ml. de sangre y 4.9 ml. De sol. Isotónica de NaCI al 0.9% para formar una suspensión de eritrocitos al 2%
   
3. Marcar 3 tubos de ensaye con las letras A, B, Rh respectivamente depositar en el tubo “A” una gota de suero Anti-A, en el tubo “B” una gota de suero Anti-B y en el tubo “Rh” una gota de suero Anti-D. 
   
4. Añadir a cada tubo una gota de suspensión de eritrocitos al 2%(preparadas con anterioridad).
   
5. Centrifugar a 1,000 r.p.m. durante un minuto.
   
6. Sacar los tubos e inmediatamente observar si existe aglutinación.
   

INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS

• Si existe aglutinación en el tubo “A” la sangre es del tipo “A”    
• Si existe aglutinación en el tubo “B” la sangre es del tipo “B”
• Si existe aglutinación en los tubos A y B la sangre es del tipo “AB”
• Si no existe aglutinación en los tubos A y B la sangre es del tipo “O”
• Si existe aglutinación en el tubo Rh la sangre será de factor Rh positivo
• Si no existe aglutinación en el tubo Rh la sangre será de factor Rh negativo

RESULTADOS

El paciente tiene un grupo sanguíneo: A Rh(positivo)

CONCLUSIÓN.

Un grupo sanguíneo es una clasificación de la sangre de acuerdo con las características presentes o no en la superficie de los  glóbulos rojos y en el suero de la sangre. Las dos clasificaciones más importantes para describir grupos sanguíneos en humanos son los  antígenos (el sistema ABO) y el factor Rh.

 Su nombre proviene de los tres tipos de grupos que se identifican: los de antígeno A, de antígeno B, y "O". Las transfusiones de sangre entre grupos incompatibles pueden provocar una reacción inmunológica que puede desembocar en hemolisis, anemia, fallo renal, shock y muerte.

El motivo exacto por el que las personas nacen con anticuerpos contra un antígeno al que nunca han sido expuestas es desconocido. Se piensa que algunos antígenos bacterianos son lo bastante similares a estos antígenos A y B que los anticuerpos creados contra la bacteria reaccionan con los glóbulos rojos ABO-incompatibles.

• Es importante que al igual que cualquier otro proceso realizado en el laboratorio, el GRUPO SANGUÍNEO Y FACTOR Rh se lleve a cabo adecuadamente pues de no ser así cualquier alteración afectaría nuestro resultado.

Recuento de plaquetas

Objetivo: Que el alumno aprenda a contar correctamente las plaquetas.

Introducción:

Las plaquetas son los elementos formes mas pequeños de la sangre, actúan en la hemostasia y en el mantenimiento de la integridad vascular, ademas de participar en el proceso de la coagulación sanguínea.

Las plaquetas son difíciles de contar debido a que son pequeñas y deben distinguirse de los restos celulares. otra fuente de dificultad reside ne en su tendencia de adherirse al cristal , a cualquier cuerpo extraño y en particular unas de otras.

Para el conteo de plaquetas se utiliza oxalato de amonio como diluyente y se cuentan en los mismos cuadros para glóbulos rojos y el resultado se multiplica por 1000.

Material y Reactivos

1. Pipeta de thoma para globulos blancos
2. Microscopio
3. Caja de Petri con papael filtro
4. Camara de Neubauer 
5. Oxalato de amonio al 1%
6. Sangre venosa con EDTA

Procedimiento 

1. Mezclar la sangre perfectamente.
   
2. Aspirar la muestra hasta la marca 0.5
   
3. Limpiar con una gasa el exceso de sangre y aspirar oxalato de amonio hasta la marca 11.
   
   
4. Mezclar de 3 a 5 min. desechar las 3 primeras gotas y llenar las cuadriculas de la cámara de Neubauer.
   
5. Dejar sedimentar de 10 a 15 min. la cámara en una caja petri con un disco de papel filtro húmedo en el fondo para evitar la evaporación.
   
6. Enfocar la camara y contar las plaquetas en los mismos cuadros para globulos rojos empleando el objetivo 40 X.
   
7. La plaquetas contadas se multiplican por  1 000 para obtener el numero de plaquetas por mm.

RESULTADOS

• Los recuentos de plaquetas, al igual que los eritrocitos y leucocitos,  se expresan como concentraciones, que en este caso serían número de células por unidad de volumen de sangre, que es 1mm3
• Después de contar las plaquetas presentes en los 400 cuadritos centrales, el número obtenido se multiplica por el factor de dilución  de la siguiente manera:
• N° de plaquetas x mm3 = No. De plaquetas contadas X dilución X 10
• Dilución: 1:100 
• Este factor corresponde, para obtener los resultados por mm3 ya que el volumen de la cámara es de 0.1 mm3
• El número de plaquetas fue de 320, por lo que al realizar los cálculos quedaron así:
• No. de plaquetas = 320 X 100 X 10= 320 000 plaquetas por mm3, lo que indica un índice esta en el rango normal  de plaquetas.

VALORES DE REFERENCIA

(Millones de células/mm3)

Hombres y Mujeres:………………………………..150 000 - 450 000

CONCLUSIÓN

El recuento de plaquetas es de suma importancia y es parte del recuento celular de la sangre como prueba de rutina.

El paciente con un trastorno hemorrágico, clínicamente significativo, acude al médico con algunos tipos de síntomas hemorrágicos, con lo que se puede indicar la parte defectuosa del mecanismo de coagulación, y dentro de estas causas pueden estar la cantidad inadecuada de plaquetas.

La hemorragia de vasos sanguíneos subcutáneos  en piel intacta se puede ver como petequias o equimosis. Cuando se encuentran  equimosis en gran cantidad y sin traumatismo aparente, el trastorno se conoce como Diátesis Hemorrágica y puede ser producida por anormalidades en los vasos sanguíneos, por la disminución en el número de plaquetas o por el mal funcionamiento.

TINCION DE WRIGHT

Solución colorante poli cromática para la tinción diferencial de la mayoría de las estructuras de sangre así como algunos de sus parásitos, por el método de Wright. Uso exclusivo de diagnóstico in vitro.

REACTIVOS.

1.- Colorante de Wright.

2.- Buffer de Fosfato.

PROCEDIMIENTO.

1. Se procede a realizar un frotis sanguíneo por medio de punción venosa.
   
2. Colocar la placa con la extensión hacia arriba en una gradilla de tinción.
   
3. La extensión se cubre con 1-2 ml del colorante durante 3 o 4 minutos.
   
4. Agregar suavemente Buffer de Fosfatos en la misma cantidad que el colorante y mezclar soplando sobre la superficie pero evitando derrames. Dejar de 8 a 10 minutos hasta que aparezca una escarcha metálica.
   
5. Quitar el colorante con agua destilada en forma horizontal, luego tomando la placa en forma vertical, continúe el lavado hasta que haya desaparecido toda la coloración azul.
   
   
   
6. Secar al aire en la posición vertical sobre papel absorbente.

RECUENTO DIFERENCIAL DE LEUCOCITOS.

INTRODUCCION.

El recuento diferencial de leucocitos consiste en reconocer y valorar las proporciones relativas de las distintas variedades de glóbulos blancos que se observan en el frotis teñido de sangre.

Al conocer la proporción de células sanguíneas que están presentes en el torrente sanguíno cualquier trastorno patológico que altere el sistema hematopoyético podría verse reflejado un cambio de la proporción de una especie celular. Para el recuento diferencial se tiene que observar un mínimo de 100 leucocitos.

Hay varios métodos de recuento diferencial de leucocitos pero el más utilizado es el de almena y en línea.

MATERIAL Y REACTIVOS.

.-Frotis sanguíneo teñido.

.-Microscopio.

.-Aceite de inmersión.

.-Un contador de células.

PROCEDIMIENTO.

1.  Se coloca el frotis en el microscopio y se enfoca.
   
2. Se le agrega una gota de aceite de inmersión y se observa con el objetivo de 100X
3.  Si el recuento se hace en línea se empieza en el borde del frotis hasta el otro borde  en línea paralela hasta contar 100 leucocitos.
4. Se van contando los mononucleares (monocitos y linfocitos) y los polimorfonucleares (neutrófilos, basófilos y eosinofilos) según su morfología.
   
5.  Se reportan en % (valor relativo) o en valor absoluto (mm3)

VALORES DE REFERENCIA.

	ADULTOS	NIÑOS
LINFOCITOS	20-55%	20-50%
MONOCITOS	2-6%	0-9%
EOSINOFILOS	1-5%	0-8%
BASOFILOS	0-1%	0-1%
NEUTROFILOS	45-70%	20-60%
BANDAS	0-5%	1-6%

Resultados:

LINFOCITOS: 40%

MONOCITOS: 3%

EOSINOFILOS: 2%

BASOFILOS: 0%

NEUTROFILOS: 58%

BANDAS: 4%

Conclusión

De acuerdo a como se haya realizado nuestra tinción y en base a los conocimientos previos que tengamos de la identificación de estructuras leucocitarias, podremos identificar con facilidad estos cuerpos, cuantificándolos y diferenciándolos para conocer el estado de salud del paciente y así contribuir al diagnóstico de posibles leucemias u otras enfermedades. En base a los resultados obtenidos y comparándolos con los valores de referencia podemos deducir que nuestro paciente se encuentra en condiciones normales

CONTEO DE LEUCOCITOS

Introducción:

El conteo de los elementos formes de la sangre es indispensable para la hematología diagnostico Para contar los leucocitos se diluye una cantidad exacta de sangre con el líquido Turk, que es una solución hipotónica que destruye a los eritrocitos y observa la estructura de los leucocitos, esta mezcla se coloca en una cámara de Neubauer y se cuenta el número de células en los cuadros indicados.

Material y Reactivos

• Pipeta de toma para globulos blancos
• Una cámara de Neubauer
• Un microscopio
• Gasas
• Sangre venosa con EDTA

PROCEDIMIENTO

1. Obtener sangre venosa con EDTA y mezclar perfectamente.
   
2. Aspirar sangre con la pipeta de Thoma hasta la marca 0.5.
   
3. Limpiar la parte externa de la pipeta con gasa o papel absorbente.
   
4. Aspirar liquido de Thurk hasta la marca 11.
   
5. Retirar la boquilla de la pipeta y sellar los extremos con papel parafilm.
   
6. Agitar la pipeta de Thoma de 3 a 5 min. y preparar la cámara con el cubrehematimetro.
   
7. Descartar las primeras 3 gotas y llenar la cámara por capilaridad por uno de los bordes del cubrehematímetro, sin que se formen burbujas o sobrepasen los canales de la cámara.
   
8. Dejar reposar de 3 a 5 min. la cámara con la muestra.
   
9. Enfocar la cámara en 1 microscopio y contar los leucocitos con el objetivo seco débil en 64 cuadros de las 4 cuadriculas de los extremos.
   
10. Multiplicar el número de leucocitos contados por 50
    

                   

RESULTADOS

Los recuentos de leucocitos, al igual que los eritrocitos,  se expresan como concentraciones, que en este caso serían número de células por unidad de volumen de sangre, que es 1mm3

Después de contar los glóbulos blancos de los 4 cuadrados angulares, se suman el total de ellos y con dicha cantidad de hace el siguiente cálculo:

N° de leucocitos x mm3 = altura x dilución x área 

N° de leucocitos x mm3 = 1/10 x 1/20 x 4 = 1/10 000

N° de leucocitos x mm3 = 4/200 = 1/50

N° de leucocitos x mm3 = N° de leucocitos contados x 50

Resultado

El número de leucocitos fue de 178, que al multiplicarse por 50 daba como resultado 8900/mm3, lo que indica un índice normal, pues el paciente era mujer, de 17 años de edad.

VALORES DE REFERENCIA

(Millones de células/mm3)

Hombres y Mujeres:………………………………..5 000-10 000

Valores de referencia:

Leucocitos:

• Adultos: 5000 - 10 000 / mm3
• Recién nacidos: 10 000 - 25 000 / mm3
• Niños: 8000 - 15 000

Conclusión  

La modificación del porcentaje de leucocitos puede orientar al diagnóstico de enfermedades infecciosas, inflamatorias, y otros procesos.

Cuando en la medición de leucocitos se ven células jóvenes aparecen los neutrófilos en forma de núcleo en forma de bastón (cayados), y un aumento del porcentaje de los glóbulos blancos polimorfonucleares. Esto se denomina como "desviación a la izquierda". Este término sugiere infecciones bacterianas agudas.

La eosinofília, que es el aumento del porcentaje o del número total de eosinófilos, sugiere un cuadro alérgico o una infección parasitaria.

El recuento de leucocitos se realiza habitualmente en un estudio de hematimetría y recuento leucocitario completo.

RETICULOCITOS

OBJETIVO: Que el alumno aprenda a identificar y cuantificar correctamente a los retículocitos.

INTRODUCCIÓN: Los retículocitos son eritrocitos jóvenes y contienen en su interior RNA- ribosomal el cual puede observarse en forma de red (de ahí su nombre) mediante un colorante supravital. Cuando en la médula osea aumenta la eritropoyesis, aumenta también el número de reticulocitos que salen hacia la circulación.

MATERIAL, REACTIVOS Y EQUIPO:

• Sangre venosa con EDTA
• Colorante de azul de cresil brillante o nuevo azul de metileno 
• Tubos de ensaye
• Portaobjetos
• Pipetas pasteur tallo corto con bulbo
• Baño maría
• Microscopio
• Aceite de inmersión
  
  

PROCEDIMIENTO

1. Mezclar la muestra sanguínea y en un tubo de ensaye colocar 5 gotas con una pipeta Pasteur
   
2. Agregarle 5 gotas del colorante con una pipeta Pasteur y mezclar
   
3. Incubar el tubo de ensaye a 37°C durante 15 min en el baño maría
   
4. Mezclar la suspensión y realizar un frotis en portaobjetos
   
5. Dejarlo secar a temperatura ambiente, agregarle una gota de aceite de inmersión y observar con el objetivo 100x. 
   
6. Buscar células que presenten una red con coloración azul (reticulocitos). contar 1000 eritrocitos en diferentes partes del frotis e ir registrando el número de reticulocitos observados.
   

RESULTADO:

Numero de reticulocitos observados x 100/ número total de eritrocitos

VALORES DE REFERENCIA

ADULTOS: 0.5-2.0%

RECIEN NACIDOS: 2.5-6.5%

RESULTADO: 

18 X 100/ 1000 = 1.8%, el paciente está dentro de los valores normales en adultos. por lo tanto son correctos los cálculos 

Observaciones:

Los reticulocitos se pueden observan como hematíes con granulaciones o filamentos, de color azul oscuro. También podemos observar con esta tinción cuerpos de Heinz, que son alteraciones en las cadenas de hemoglobina o déficit de alguna enzima eritrocitaria, dan lugar a la hemoglobina inestable que se desnaturaliza con facilidad dando lugar a precipitado dentro del hematíe.